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PCR实验室

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PCR实验室

基因扩增实验室又称PCR实验室,为提升公卫医疗机构应对突发传染病检测或鉴别能力,国家卫健委提倡建设基因扩增实验室。

PCR检验实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能从试剂贮存和准备区标本制备区扩增反应混合物配置和扩增区扩增产物分析区。各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。

PCR实验室

试剂贮存和准备区:

该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区,不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。对与气流压力的控制,本区应对外界保持微正压。

标本制备区:

该区域主要进行的操作为样本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外,由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应避免在本区内不必要的走动。

扩增反应混合物配置和扩增区:

该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外,已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区) 的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区) 制备成反应混合液等也可在本区内进行。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净工作台内进行。

扩增产物分析区:

该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。测定这一步骤多用全自动医用PCR分析系统,判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊断、基因复制以及亲子鉴定等。

本区是最主要的扩增产物污染来源,因此对本区的压力梯度要求为:相对临近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其他区域。

pcr实验室


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